Metoda e përcaktimit të glukozës oksidazës

Parimi i metodës. Metoda bazohet në specifikën e veprimit të enzimës glukozë oksidazë. Kjo enzimë oksidon glukozën në prani të oksigjenit molekular për të formuar glukonolakton, e cila hidrolizon spontanisht në acidin glukonik. Glukoza oksidaza oksidon glukozën për të formuar peroksid hidrogjeni (H₂oh₂), e cila reagon me 4-aminoantipirinë dhe fenolin nën veprimin e peroksidazës. Si rezultat, formohet një përbërës me ngjyrë rozë, dendësia optike e të cilit në 510 nm është proporcionale me përqendrimin e glukozës në mostër.

glukozë + O₂ + H₂oh Acid acid glukonik + H₂oh₂

2 N₂oh₂ + 4-aminoantipirinë + fenol Quinoniminë + 4H₂oh

pajisje: CPK, centrifugë, termostat, rafte, tuba provë, pipeta, materiale biologjike, reagentë të përfshirë në zgjidhjen e punës.

mostër eksperimentale, ml

mostër standarde, ml

provë boshe (N₂O), ml

Zgjidhja e kalibrimit të glukozës (referenca)

Tubat inkubohen në një termostat në 37 ° C për 15 minuta, pastaj ngjyrosen në një CPC me një filtër të gjelbër në cuvetta me një trashësi të shtresës prej 5 mm ndaj një kampioni bosh (N₂O). Ngjyra rozë është e qëndrueshme për 1 orë pas inkubacionit.

llogaritje përmbajtja e glukozës prodhohet nga formula:

C =x C standarde ku

C është përmbajtja e glukozës në kampionin eksperimental, mol / l,

prill - densiteti optik i mostrës,

Ha - densiteti optik i mostrës së kalibrimit,

Standardi C - përmbajtja në zgjidhjen e kalibrimit, mol / l.

Vlerat normale:  të porsalindurit - 2.8-4.4 mmol / l

 fëmijë - 3.9 -5.8 mmol / l

 të rritur - 3.9 - 6.2 mmol / l

Hipoglikemia (GHC).Rritja e glukozës në gjak është për shumë arsye, sipas të cilave dallohen dy grupe të hiperglicemisë.

1. izolues - i shoqëruar me insulinë të pamjaftueshme në trup ose për shkak të joefikasitetit të veprimit të tij.

2. Jashtënjyrore (ekstrasulare) - nuk varen nga ndikimi i insulinës.

Proceset e mëposhtme janë më domethënëse në formimin e HHC: rritja e prishjes së glikogjenit, rritja e neoglukogjenezës, frenimi i sintezës së glikogjenit, ulja e përdorimit të glukozës në inde nën ndikimin e antagonistëve hormonalë të insulinës: somatotropin, glukortikoide, tiroksinë, tyrotropinë.

Hiperglicemia alimentare vërehet me marrje të tepruar të glukozës në gjak (për shembull, hiperglicemia me ngarkesë sheqeri). Hiperglicemia "hepatike" ndodh në lezione difuze të mëlçisë.

Hiperglicemia e vazhdueshme dhe e rëndë më së shpeshti shoqëron diabetin. Shtë zakon të izolohet diabeti mellitus i varur nga insulina dhe diabeti jo-i varur nga insulina, ose, përkatësisht, diabeti i tipit I dhe diabeti i tipit II. Formimi i diabetit tip I shoqërohet kryesisht me sintezën e dëmtuar dhe metabolizmin e insulinës.

Grupi i dytë i hiperglicemisë shoqërohet kryesisht me hiperfunksionimin e gjëndrave endokrine që prodhojnë hormone - antagonistët e insulinës. Isshtë vërejtur në sëmundje të tilla si sindromi i Itenko-Cushing dhe sëmundja, akromegalia, tirotoksikoza, feokromocitoma, glukoganoma. Nivelet e glukozës në gjak rriten me sëmundje të caktuara të mëlçisë (në veçanti, në 10-30% të pacientëve me cirrozë të mëlçisë), hemokromatozë (cirroza e pigmentuar e mëlçisë, diabeti bronz).

Hipoglikemia (GPG) - një ulje e glukozës në gjak - më së shpeshti shoqërohet me një rritje absolute ose relative të niveleve të insulinës në gjak. Hipoglicemia ekstrapankreative është vërejtur si rezultat i një çekuilibri midis ashpërsisë së proceseve të glikogjenolizës dhe glikoneogjenezës në mëlçi në hepatit akut dhe kronik, cirrozë, distrofi të mëlçisë akute dhe subakute, dehje nga alkooli, helmim me arsenik, fosfor, me verdhë më të zgjatur obstruktive . Një ulje e përqendrimit të glukozës në gjak është vërejtur shpesh tek pacientët që vuajnë nga kanceri i ezofagut dhe tumoreve të tjera malinje të lokalizimit jashtë pankreatitit (fibroma, fibrosarcoma, neuroma), si dhe me të vjella të pafytyrueshme, anoreksi, diabeti hepatik, uremia, laktacion i dobishëm dhe glukozori në gratë shtatzëna.

Hipoglikemia mund të jetë me origjinë qendrore për shkak të traumës mendore, encefalitit, hemoragjisë subarachnoidale, tumorit të trurit.

1. disordersrregullime të trashëguara të tretjes së karbohidrateve.

2. Cilat lloje të hipergglozozemisë janë të njohura për ju?

3. Cilat janë shkaqet e hiperglukozemisë patologjike?

4. Cili është shkaku i diabetit mellitus i varur nga insulina?

5. Cilat janë shkaqet biokimike të sëmundjeve trashëgimore: a) glikogjenoza? b) aglykogjenoza? c) fruktozemia? d) galaktozemi?

6. Cilat janë ndryshimet biokimike në metabolizmin e karbohidrateve gjatë agjërimit?

7. Parimi i metodës për përcaktimin e tolerancës së glukozës.

Kur përshkruhet metoda e glukozës oksidazës?

Ky test përdoret për të zbuluar tolerancën e dëmtuar të sheqerit dhe zhvillimin e prediabetes, si dhe në kulmin e sëmundjes. Por për qëllime të tilla, analiza përdoret rrallë, kjo vjen për shkak të kostos së saj të lartë dhe pritjes së gjatë të një rezultati. Më shpesh, përcaktimi i glukozës në gjak dhe urinë duke përdorur këtë metodë përdoret në diagnostikimin diferencial të sëmundjeve të tilla si:

Sheqeri ulet menjëherë! Diabeti me kalimin e kohës mund të çojë në një grup të tërë sëmundjesh, siç janë problemet me shikimin, kushtet e lëkurës dhe flokëve, ulcerat, gangrenën dhe madje edhe tumoret kancerogjene! Njerëzit mësuan përvojë të hidhur për të normalizuar nivelin e sheqerit të tyre. lexoni në.

• sindromi i intolerancës së laktozës,
• intoleranca e fruktozës,
• sekretimi i fruktozës me lëngjet e trupit,
• përqendrimi i shtuar i pentozës në urinë.

Avantazhi i padyshimtë i testit të glukozës oksidazës është saktësia e tij.

Cila është baza e kësaj metode?

Ekzistojnë metoda të ndryshme për përcaktimin e përqendrimit të glukozës në gjak, por glukoza oksidaza është më e sakta. Bazohet në faktin se gjatë bashkëveprimit të sheqerit me oksigjenin atmosferik, reagenti oksidohet. Peroksidi i hidrogjenit lëshohet në tretësirë. Kjo substancë bashkëvepron me ortotoluidinë për të formuar një përbërje me ngjyrë. Për sjelljen e këtij reagimi, prania e enzimave speciale është e nevojshme. Gjatë reaksionit të oksidimit, glukozë oksidaza duhet të jetë e pranishme, dhe kur ngjyrosni lëngun, peroksidaza duhet të jetë e pranishme. Intensiteti i ngjyrës së zgjidhjes do të varet nga përmbajtja e glukozës dhe do të jetë më intensiv në përmbajtjen e tij të lartë.

Thelbi i përcaktimit të glukozës oksidazës

Vlerësimi i rezultatit ndodh duke përdorur metodën sasiore të fotometrisë pas së njëjtës periudhë kohore. Mandatoryshtë e detyrueshme të përdorni një zgjidhje kalibrimi që përmban një normë të caktuar të sheqerit të deklaruar dhe, duke u nisur nga ajo, ju mund të gjykoni përqendrimin e glukozës në lëngjet e trupit, shpesh në gjak.

Si kryhet analiza?

Materiali merret nga pacienti me stomak bosh. Për provën, gjaku venoz përdoret në një sasi prej 5 ml. Në prag të diagnozës, pacientit i tregohet një dietë e rreptë. Kjo do të bëjë të mundur gjykimin e besueshmërisë së rezultatit dhe të përjashtojë gabimet e mundshme të analizës. 2 ditë para marrjes së gjakut, pacienti duhet të braktisë zakonet e këqija të pirjes së alkoolit dhe pirjes së duhanit. Shtë gjithashtu e nevojshme të kufizoni konsumimin e ushqimeve tepër të ëmbla dhe të shmangni situatat stresuese kur është e mundur.

Për të marrë plazmën me sheqer, gjaku është i përqendruar.

Më shpesh, kjo metodë për përcaktimin e përqendrimit të glukozës kryhet me anë të centrifugimit, të cilat elementët e formës janë izoluar. Sasia e sheqerit përcaktohet tashmë në plazma. Kur të shtohen të gjitha reagentët e nevojshëm në të, ngjyra vërehet pas 20 minutash nëse prova kryhet në temperaturën e dhomës. Llogaritja e glukozës kryhet sipas orarit të kalibrimit ose duke përdorur rregullin e servings.

Reagentët e hulumtimit

Për të përcaktuar sheqerin, është më e përshtatshme të përdoren metoda të shprehura për përcaktimin e glukozës në gjak. Kjo është për shkak të lehtësisë së përdorimit dhe rezultateve të shpejta. Përveç kësaj, pacienti nuk ka nevojë të shkojë në laborator ose spital. Por ndryshe nga testi i oksidazës së glukozës, një diagnozë e tillë nuk është e besueshme. Meqenëse nuk dallon glukozën nga sheqernat e tjera dhe përcakton përqendrimin e tyre së bashku.

Baza e reaksionit të glukozës oksidazës është tretësirë ​​klorur natriumi 9% dhe sulfat i zinkut 50%. Ato shtohen në fazën e centrifugimit të gjakut. Përveç kësaj, përdoret një zgjidhje tampon me acid acetik dhe acetat natriumi. Metoda e titrimit përcakton pH-në e saj në 4.8. Pas kësaj, shtohet glukoza oksidaza, për shkak të së cilës lirohet peroksidi i hidrogjenit dhe peroksidaza, e cila merr pjesë në ngjyrosjen e zgjidhjes në përqendrimin e dëshiruar për të marrë një rezultat të saktë.

Normat në analizë

Matja e sheqerit bëhet në njësi speciale - milimole për litër zgjidhje.

Testi i gjakut të glukozës oksidazë duhet të kalojë në stomak bosh dhe të përdorë plazma ose serum për këtë. Norma e sasisë së saj për të rriturit si për gratë ashtu edhe për burrat është 3.3-5.5. Për fëmijët nën 15 vjeç, kjo shifër është pak më e ulët dhe varion nga 3.2-5.3. Tek të porsalindurit, glukoza në gjak është 1.7-4.2. Një rritje e treguesve vërehet me zhvillimin e një pacienti me diabet mellitus ose me tolerancë të dëmtuar të glukozës. Kjo gjendje është prediabeti, dhe nëse lihet pa trajtuar në kohë, së shpejti do të çojë në zhvillimin e kësaj patologjie të rëndë.

A duket akoma e pamundur kurimi i diabetit?

Duke gjykuar faktin se ju po lexoni këto rreshta tani, një fitore në luftën kundër sheqerit në gjak të lartë nuk është ende në anën tuaj.

Dhe a keni menduar tashmë për trajtimin në spital? Shtë e kuptueshme, sepse diabeti është një sëmundje shumë e rrezikshme, e cila, nëse nuk mjekohet, mund të rezultojë në vdekje. Etja e vazhdueshme, urinimi i shpejtë, shikimi i paqartë. Të gjitha këto simptoma janë të njohura për ju të dorës së parë.

Por a është e mundur për të trajtuar shkakun dhe jo efektin? Ne ju rekomandojmë të lexoni një artikull mbi trajtimet aktuale të diabetit. Lexoni artikullin >>